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厦门施科生物科技有限公司
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流式细胞技术样品制备方法。

作者:施科 发布时间:2014-08-02

1. 细胞收集:收集浓度1~5×106个/mL的细胞悬液,PBS(PH7.4)洗涤一次,1000~1500rpm离心5min。

2. 细胞固定:离心后去上清,4%多聚甲醛固定室温固定细胞10~20min。

3. 洗涤离心:1000~1500rpm离心5min,去上清,PBS洗涤一次,离心去上清。

4. 打孔封闭:用含0.2% Triton-X 100的PBS重悬细胞,室温孵育10~20min,1000~1500rpm离心5min去上清。

5. 一抗孵育:一抗稀释后室温孵育30~60min,PBS洗涤两次,离心去上清。

6. 二抗孵育:荧光二抗稀释后室温孵育30~60min,PBS洗涤两次,离心去上清。(如果用的是荧光标记直标的一抗省略此步骤)。

7. 上机检测:PBS重悬细胞,流式细胞仪检测分析荧光值。