免疫荧光 --冰冻切片（IF-Fr）操作步骤。

1. 烘片：冰冻切片在60℃烘箱干燥30min，使组织贴片；

2. 复水，打孔：0.5% Triton-X/PBS于37℃透化处理15-20min，PBS洗涤，5min×3；

3. 抗原修复：柠檬酸修复液（PH6.0）修复，先将柠檬酸修复液加热到90℃左右，在92-98℃之间处理片子17min，后自然降温到室温后将片子取出，PBS洗涤，10min×3；

4. 封闭：3% BSA-PBS 37℃处理1h，不用洗涤；

5. 一抗孵育：用PBS稀释一抗，4℃过夜；

6. 先用PBS涮洗片子几秒，后换PBST洗涤，10min×2，再换PBS洗涤，10min×2；

（以下步骤严格避光）

7. 二抗孵育：PBS稀释二抗，37℃孵育1h，PBS洗涤10min×3；

8. 核染：DAPI进行核染10min，PBS洗涤10min×3；

9. 脱水，透明：70%乙醇，80%乙醇，95%乙醇，100%乙醇依次脱水，2min/次；100%二甲苯，100%二甲苯透明，5min/次；

10. 封片：防淬灭封片剂封片；

11. 镜检