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免疫荧光 --冰冻切片(IF-Fr)操作步骤。

作者:施科 发布时间:2014-08-02

1. 烘片:冰冻切片在60℃烘箱干燥30min,使组织贴片;

2. 复水,打孔:0.5% Triton-X/PBS于37℃透化处理15-20min,PBS洗涤,5min×3;

3. 抗原修复:柠檬酸修复液(PH6.0)修复,先将柠檬酸修复液加热到90℃左右,在92-98℃之间处理片子17min,后自然降温到室温后将片子取出,PBS洗涤,10min×3;

4. 封闭:3% BSA-PBS 37℃处理1h,不用洗涤;

5. 一抗孵育:用PBS稀释一抗,4℃过夜;

6. 先用PBS涮洗片子几秒,后换PBST洗涤,10min×2,再换PBS洗涤,10min×2;

(以下步骤严格避光)

7. 二抗孵育:PBS稀释二抗,37℃孵育1h,PBS洗涤10min×3;

8. 核染:DAPI进行核染10min,PBS洗涤10min×3;

9. 脱水,透明:70%乙醇,80%乙醇,95%乙醇,100%乙醇依次脱水,2min/次;100%二甲苯,100%二甲苯透明,5min/次;

10. 封片:防淬灭封片剂封片;

11. 镜检