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免疫组织化学--石蜡切片(IHC-P)操作步骤!!

作者:施科 发布时间:2014-08-02
  1. 烘片:石蜡切片在60℃烘箱干燥30min,使组织贴片;
  2. 脱蜡:100%二甲苯,100%二甲苯,100%乙醇,95%乙醇,80%乙醇,70%乙醇依次处理片子,二甲苯10min/次,乙醇5min/次;
  3. 复水:PBS处理20min;
  4. 抗原修复:柠檬酸修复液(PH6.0)修复,先将柠檬酸修复液加热到90℃左右,在92-98℃之间处理片子17min,后自然降温到室温后将片子取出,PBS洗涤,10min×3;
  5. 封闭:3% BSA-PBS 37℃处理1h,不用洗涤;
  6. 一抗孵育:用PBS稀释一抗,4℃过夜;
  7. 先用PBS涮洗片子几秒,后换PBST洗涤,10min×2,再换PBS洗涤,10min×2;
  8. 消除内源性氧化酶:3% H2O2室温处理13min,PBS洗涤5min×3;
  9. 二抗孵育:PBS稀释二抗,37℃孵育1h,PBS洗涤10min×3;
  10. DAB显色:显色15-30min;
  11. 蒸馏水充分洗涤以终止显色反应;
  12. 核复染:苏木素进行核复染大概5-10min;
  13. 脱水,透明:70%乙醇,80%乙醇,95%乙醇,100%乙醇依次脱水,2min/次;100%二甲苯,100%二甲苯透明,5min/次;
  14. 封片:中性树胶封片;
  15. 镜检。