动物组织样品的实时荧光定量PCR——北大医学部推荐

进行动物组织样品的实时荧光定量PCR
时间：2009年8月10日

在对不同动物组织样品进行特定基因的mRNA水平检测过程中，实时荧光定量PCR以其安全、快速、灵敏等特点在实验中占据着绝对优势。在使用此实验手段之初，实验室人员通常需要分别购买荧光染料以及酶体系等用于实时荧光定量PCR，通过人为配置复杂体系进行实验。这种完全依靠人为手工配置的过程，对于极度灵敏的实时PCR而言是难以令人满意的。实验试剂质量的参差不齐和实验人员的训练水平都会影响实时定量PCR结果的准确性和重复性，有时甚至会导致实验的失败和珍贵样品的浪费，因此使用商品化实时定量PCR的mixture逐渐成为趋势。进口的实时定量PCR mixture大多价格昂贵，对于消耗量巨大的实验室是难以负担的，故国产的实时定量PCR mixture是实验室的首选。
百泰克公司的2*SYBR real-time PCR premixture在我室目前进行的实验研究中使用状况良好，试剂质量稳定（我个人曾经最多反复冻融过4次，实验效果也没有受到影响），能够快速地帮助实验人员得到所需实验结果。附图为我室人员采用20ul体系进行实验的结果，如图1所示，使用百泰克2*SYBR real-time PCR premixture进行的实时定量PCR溶解曲线良好，背景干净，产物单一特异；如图2、3所示，使用百泰克2*SYBR real-time PCR premixture进行的实时定量PCR得到的扩增曲线平滑，背景低，起峰时间正常；如图4所示，为实验后得到的结果统计。
此外，良好的实时结果亦取决于RNA质量。百泰克公司的离心柱型总RNA提取试剂盒对于动物组织样品的RNA提取效果良好、性价比较高，是值得推荐的。如图5所示，对于肾脏和肝脏这样的组织，百泰克公司的RNApure高纯总RNA快速提取试剂盒（离心柱型）（货号：RP1201或RP1202）与invitrogen公司的TRIzol试剂提取有类似的效果，但对于胰腺这样极其容易发生自溶，并且RNA又极易降解的组织，百泰克公司的离心柱型总RNA提取试剂盒提取的样品几乎没有降解，具有极大的优势。

图1：百泰克公司2*SYBR real-time PCR premixture所得溶解曲线

图2：百泰克公司2*SYBR real-time PCR premixture所得扩增曲线

图3：百泰克公司2*SYBR real-time PCR premixture所得扩增曲线（Y轴放大）

图4：百泰克公司2*SYBR real-time PCR premixture所得结果统计

     百泰克 TRIzol              百泰克 TRIzol         百泰克TRIzol 
        Pancreas                        Kidney                       Liver

图5： 动物不同组织RNA提取的试剂比较

北京大学医学部生理系 孔晓牧